培养基的主要成分有氮源、碳源、无机盐、水分及一些生长因子,它们主要为细菌的生长繁殖提供营养和生长环境。
水:水是良好的溶剂,细菌所需要的营养物质必须先溶于水,营养的吸收与代谢均需有水才能进行。制备培养基常用不含杂质的蒸馏水或离子交换水。
氮源:氮源主要用于构成菌体细胞物质(氨基酸、蛋白质、核酸等)和含氮代谢物。常用的氮源可分为两大类:有机氮源和无机氮源。
碳源:碳源是组成培养基的主要成分之一。常用的碳源有糖类、油脂、有机酸和低碳醇。在特殊情况下(如碳源贫乏时),蛋白质水解产物或氨基酸等也可被某些菌种作为碳源使用。
无机盐:无机盐是细胞维持生命活动所的营养成分,主要有Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Cl-、PO43-、SO42-、HCO3-等,主要作用为维持细胞培养液渗透压平衡,参与细胞的代谢活动。此外,通过提供钠,K+和Ca2+,帮助细胞调节细胞膜功能。
注意事项:
培养基在使用前通过高压或过滤灭菌。防止污染应该注意以下事项:
确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。
同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。